توالییابی سنگر (Sanger Sequencing) چیست؟
Sanger Sequencing که با نام توالییابی زنجیره‌ای خاتمه‌یافته (Chain-Termination Sequencing) نیز شناخته می‌شود، یکی از روش‌های کلاسیک و معتبر در حوزه تعیین توالی DNA است. این فناوری توسط فردریک سنگر در دهه 70 میلادی توسعه داده شد و هنوز هم به‌عنوان یک روش طلایی (Gold Standard) برای بررسی دقیق توالی‌های ژنتیکی استفاده می‌شود.
در این روش، از دی‌اکسی‌نوکلئوتیدهای خاتمه‌دهنده (ddNTPs) در واکنش PCR استفاده می‌شود که باعث توقف سنتز DNA در نقاط خاص می‌شود. سپس قطعات حاصل از طریق الکتروفورز و تحلیل سیگنال‌های فلورسانس شناسایی شده و توالی دقیق DNA تعیین می‌گردد.
کاربردهای Sanger Sequencing
توالییابی Sanger همچنان در حوزه‌های متعددی از تحقیقات و تشخیص‌های ژنتیکی مورد استفاده قرار می‌گیرد.
تایید نتایج حاصل از توالی‌یابی‌های نسل جدید (NGS) به دلیل دقت بالا
شناسایی جهش‌های نقطه‌ای در ژن‌های مرتبط با بیماری‌ها
تحلیل کلون‌های پلاسمیدی و بررسی صحت توالی درج شده
تشخیص ژنتیکی بیماری‌های وراثتی با توالییابی مستقیم ژن‌های هدف
بررسی تنوع ژنتیکی در تحقیقات جمعیتی یا اکولوژیکی
مزایای Sanger Sequencing
اگرچه روش‌های جدیدتر مانند NGS در بسیاری از پروژه‌ها جایگزین Sanger شده‌اند، اما این تکنولوژی مزیت‌هایی دارد که همچنان آن را برای بسیاری از کاربردها مناسب نگه داشته است.
دقت بسیار بالا در تعیین توالی کوتاه (تا 1000 باز)
قابلیت تفسیر آسان نتایج به‌واسطه خروجی کروماتوگرام
مناسب برای آنالیز نمونه‌های با حجم کم یا تعداد محدود هدف ژنتیکی
زمان کوتاه انجام آزمایش در مقایسه با روش‌های پیچیده‌تر
نتیجه‌گیری
Sanger Sequencing همچنان یکی از ابزارهای کلیدی در آزمایشگاه‌های مولکولی محسوب می‌شود. این روش با وجود ظهور فناوری‌های پرظرفیت‌تر مانند NGS، به دلیل دقت، سادگی و قابل اعتماد بودن در کاربردهایی مانند تایید جهش، بررسی کلون و تشخیص ژنتیکی، ارزش خود را حفظ کرده است.
برای محققانی که به دنبال نتایج دقیق در پروژه‌هایی با هدف خاص هستند، توالییابی Sanger همچنان انتخابی مطمئن و اثربخش محسوب می‌شود.
آشنایی با BGI
BGI مخفف Beijing Genomics Institute یک شرکت پیشرو در حوزه بیوتکنولوژی است که در زمینه تحقیقات ژنتیکی، توالییابی DNA، بیوانفورماتیک و توسعه فناوری‌های زیستی فعالیت دارد. این شرکت با تمرکز بر فناوری‌های توالییابی نسل جدید (NGS) و بیوانفورماتیک، خدماتی را برای پژوهش‌های ژنومیک انسانی، کشاورزی، محیط زیستی و داروسازی ارائه می‌دهد. BGI همچنین در پروژه‌های بین‌المللی، از جمله پروژه ژنوم انسان و تحقیقات روی ژنوم حیوانات و گیاهان، نقش فعالی داشته است.
 |
بسیار مفتخریم که خدمات برترین برندها را در BMG Biotech ایران ارائه می‌دهیم. با توجه به نیاز روزافزون پژوهشگران و دانشمندان کشور عزیزمان و لزوم استفاده از مواد و خدمات آزمایشگاهی مطابق با استانداردهای جهانی، ما همواره سعی بر ارائه توالییابی Sanger با مناسب‌ترین قیمت را داریم. |
ویژگی‌های خدمت
| نام سرویس | تعیین توالی سنگر |
|---|---|
| محصول شرکت | BGI |
| حداقل نمونه ارسالی | حداقل مقدار نمونه ارسالی (پلاسمید، PCR Product) برای هر خوانش 20 ul است. |
| زمان تحویل | 10 تا 14 روز پس از دریافت نمونه فیزیکی شما |
| ارائه محصول نهایی | به‌صورت فایل در پنل کاربری |
| غلظت | غلظت DNA برای محصولات PCR برابر با 5-50 نانوگرم، برای پلاسمید 150-300 نانوگرم و غلظت پرایمر ارسالی 10 پیکومول است. |
| کاربردها | شناسایی جهش‌ها، بررسی اختلالات ژنتیکی، شناسایی گونه‌ها، تحلیل‌های جرم‌شناسی، تحقیقات سرطان، تشخیص بیماری‌های عفونی، مطالعات فارماکوژنومیکس، نقشه‌برداری ژنی و تحلیل تنوع میکروبی. |
پروسه توالییابی Sanger در BMG
اطلاعات و نمونه فیزیکی
ابتدا با مراجعه به این بخش، اطلاعات مربوط به توالی(های) خود را برای ما می‌فرستید؛ به این نحو که یا توالی‌های خود را یکی یکی به‌صورت آنلاین اضافه کنید یا اینکه یکدفعه فایل اکسل تکمیل شده را در سایت ما بارگذاری نمایید. سپس نمونه فیزیکی توالی(های) خود را به آزمایشگاه کرج ما ارسال خواهید کرد.
تایید داده‌ها و نمونه‌ها
پس از پرداخت وجه و رسیدن نمونه‌های فیزیکی به محل آزمایشگاه ما، نوبت به تایید آنها می‌رسد. برای اطمینان از اینکه همه چیز روبه‌راه است، مواردی که نیاز به استعلام داشته باشند و رفع هر گونه ابهام، کارشناسان ما گام به گام در طول مسیر، هماهنگی‌های لازم را با شما به‌عمل می‌آورند.
توالییابی و تحویل نتایج
فرایند خوانش و توالییابی Sanger مخصوص نمونه‌های شما توسط کمپانی BGI آغاز می‌شود. پس از آماده‌سازی و چک نهایی، نتایج به‌صورت فایل (پنل کاربری) در اختیار پژوهشگر قرار می‌گیرد. گفتنی است در تمامی مراحل، تغییر وضعیت سفارش از طریق پیامک و ایمیل به اطلاع شما خواهد رسید.
مزیت‌های ما
تمایز در کیفیت و قیمت
دقیق‌ترین و سریع‌ترین سرویس
کارشناسان بین‌المللی
امکانات نوین و فناوری‌های پیشرفته
رویکرد تخصصی
حضور پژوهشگران بیوتکنولوژی
گواهینامه‌ها
گواهی اصالت از شرکت BGI
سوالات متداول
چه زمانی استفاده از Sanger Sequencing نسبت به روش‌های نسل جدید (NGS) توصیه می‌شود؟
در شرایطی که هدف، توالییابی یک یا چند ناحیه مشخص از DNA با دقت بسیار بالا است، روش Sanger همچنان به‌عنوان استاندارد طلایی مطرح است. این روش برای تایید جهش‌ها، بررسی کلون‌های تک، یا شناسایی دقیق موتاسیون‌های خاص بسیار مناسب‌تر و مقرون‌به‌صرفه‌تر از روش‌های نسل جدید است.
چه نوع نمونه‌هایی برای توالییابی Sanger قابل قبول هستند؟
برای توالییابی سنگر، نمونه‌هایی مانند DNA ژنومی، محصولات PCR و پلاسمیدها قابل استفاده هستند. مهم‌ترین نکته، کیفیت و خلوص بالای DNA است تا واکنش توالییابی بدون مشکل انجام شود.
مقدار و خلوص DNA مورد نیاز برای Sanger Sequencing چقدر است؟
معمولاً برای هر واکنش توالییابی به 20 تا 50 نانوگرم محصول PCR یا 200 نانوگرم پلاسمید با نسبت جذب A260/A280 بین 1.8 تا 2.0 نیاز است. پایین بودن خلوص می‌تواند منجر به افت کیفیت نتایج شود.
آیا نیاز به پرایمر اختصاصی هست یا از پرایمرهای عمومی استفاده می‌شود؟
اگر توالی خاصی مدنظر دارید، پیشنهاد می‌شود هنگام ثبت سفارش، پرایمر اختصاصی ارائه دهید. البته پرایمرهای عمومی مانند M13 ،T7 ،SP6 و غیره نیز در دسترس و در صورت نیاز قابل استفاده هستند.
چه نوع QC (کنترل کیفیت) برای داده‌های Sanger Sequencing ارائه می‌شود؟
گزارش کیفیت شامل مشاهده کروماتوگرام (Chromatogram)، بررسی کیفیت خوانش در هر بازه و ارائه توالی نهایی با بررسی دستی یا اتوماتیک است.
مدت زمان تحویل نتایج توالییابی چقدر است؟
معمولاً 10 تا 14 روز پس از تحویل گرفتن نمونه فیزیکی از شما، نتایج نهایی به دست شما خواهد رسید.
فرمت خروجی داده‌ها به چه صورت است؟
داده‌ها در قالب فایل‌های .ab1 (برای کروماتوگرام)، فایل FASTA (برای توالی نهایی) و در صورت نیاز، فایل‌های ویرایش‌شده یا تفسیرشده نیز ارائه می‌شود.
