DAPI چیست و چه کاربردهایی دارد؟
DAPI (4′,6-دی‌آمیدینو-2-فنیل‌ایندول دی‌هیدروکلراید) یک رنگ فلورسنت نفوذپذیر به سلول است که به DNA متصل شده و در تحقیقات زیست‌شناسی مولکولی برای رنگ‌آمیزی اسیدهای نوکلئیک مورد استفاده قرار می‌گیرد.
ویژگی‌ها و مزایای DAPI
DAPI به دلیل اتصال به شیار کوچک DNA دو رشته‌ای (ترجیحاً توالی‌های غنی از AT)، فلورسانس قوی تولید می‌کند. این ویژگی باعث می‌شود که حساسیت بیشتری نسبت به اتیدیوم بروماید در رنگ‌آمیزی DNA داشته باشد.
کاربردهای DAPI
رنگ‌آمیزی DNA در ژل‌های آگاروز: به عنوان یک رنگ فلورسنت برای تشخیص DNA در الکتروفورز ژل استفاده می‌شود.
تحلیل تغییرات DNA در طول آپوپتوز: با استفاده از فلوسایتومتری، محتوای DNA را در سلول‌های در حال مرگ بررسی می‌کند.
تشخیص مایکوپلاسما: به‌عنوان روشی حساس و اختصاصی برای شناسایی آلودگی مایکوپلاسما در محیط‌های کشت سلولی به‌کار می‌رود.
فتو فوت‌پرینتینگ DNA: برای مطالعه برهم‌کنش پروتئین‌های متصل‌شونده به DNA مورد استفاده قرار می‌گیرد.
رنگ‌آمیزی ایمنی فلورسنت سلول‌ها: برای مشاهده هسته سلول‌ها در مطالعات بیولوژی سلولی کاربرد دارد.
پایش سریع آلودگی‌های میکروبی: به‌عنوان یک روش سریع برای شناسایی باکتری‌ها و دیگر میکروارگانیسم‌ها به‌کار می‌رود.
تکنیک باندینگ کروموزومی: در بررسی ساختار و تغییرات کروموزومی استفاده می‌شود.
تشخیص سلول‌های آپوپتوزی: در مطالعات مرتبط با مرگ برنامه‌ریزی‌شده سلولی مورد استفاده قرار می‌گیرد.
مطالعه حرکت پروتئین DisA: در بررسی پویایی پروتئین‌های مرتبط با DNA در باکتری Bacillus subtilis کاربرد دارد.
رنگ‌آمیزی دانه‌های گرده: برای مشاهده و تحلیل ساختارهای زایشی گیاهان مورد استفاده قرار می‌گیرد.
عملکردهای بیوشیمیایی و فیزیولوژیکی
DAPI پس از اتصال به DNA، کمپلکسی پایدار ایجاد کرده و شدت فلورسانس آن تقریباً 20 برابر بیشتر از حالت آزاد خود می‌شود. این ویژگی، DAPI را به یکی از ابزارهای کلیدی در مطالعات زیست‌شناسی مولکولی و سلولی تبدیل کرده است.
