gRNA/Cas9 Plasmids چیست؟
پلاسمیدهای gRNA/Cas9 ابزارهای قدرتمندی برای ویرایش ژنوم مبتنی بر CRISPR هستند که امکان بیان پایدار و کارآمد سیستم CRISPR-Cas9 را در سلولها فراهم میکنند. این روش نسبت به سیستمهای مبتنی بر RNA پایداری بالاتری دارد و چالشهای مرتبط با تحویل و ناپایداری RNA را برطرف میکند.
GenScript با دریافت مجوز رسمی از موسسه Broad وابسته به MIT و دانشگاه هاروارد، مجموعهای از پلاسمیدهای تاییدشده را ارائه میدهد که در آزمایشگاه پیشرو CRISPR توسعه یافتهاند. این پلاسمیدها به محققان امکان میدهند که ویرایش ژن دقیق، پایدار و با کارایی بالا را در انواع مدلهای سلولی و ارگانیسمی انجام دهند.
ویژگیها و مزایای پلاسمیدهای gRNA/Cas9 از GenScript
بیان پایدار و طولانیمدت CRISPR/Cas9
بهینهشده برای ویرایش ژن با کارایی بالا
کاهش اثرات ناخواسته (off-target effects)
سازگار با طیف وسیعی از انواع سلولی
آزمودهشده و تأییدشده توسط موسسه Broad
این پلاسمیدها برای تحقیقات بیولوژی مولکولی، مدلسازی بیماریهای ژنتیکی، توسعه درمانهای ژنی و مهندسی ژنتیک ایدهآل هستند و به پژوهشگران امکان میدهند تا ویرایشهای ژنومی دقیق، کارآمد و قابلاطمینان را انجام دهند.
گزینههای CRISPR
SpCas9 Vectors
Cas9 endonucleases derived from the type II CRISPR systems in S. pyogenes (SpCas9) were the first Cas9 enzymes developed for mammalian genome editing. When combined with guide RNA (gRNA) sequences, these enzymes create site-specific double strand breaks (DSBs) in the genome. The CRISPR/Cas9 system accelerated genome editing for its ease of use, specificity, and high efficiency. GenScript is pleased to offer Broad Institute-validated WT SpCas9 constructs for gene editing in mammalian cells. Constructs are available either as all-in-one or dual vector systems, and can be used for non-viral, lenti-viral or adeno-associated virus (AAV) transfection. The lenti-vectors are compatible with 2nd and 3rd generation lentiviral packaging plasmids.
SpCas9 Nickase Vectors
While the CRISPR/Cas9 technology is still more specific when compared to other popular gene editing strategies, off-targeting concerns are still a reality. In an effort to improve specificity, the endonuclease activity of Cas9 was modified. WT Cas9 has two catalytic domains, RuvC and HNH, and mutations to catalytic residues within these domains (specifically, D10A in RuvC and H840A in HNH) cause Cas9 to create single strand nicks as opposed to double strand breaks (Ran et al, 2013). This Cas9 enzyme with nickase activity, or Cas9n, is guided by guide RNAs (gRNA) to opposite sides of the target genomic DNA. Cells will preferentially repair these SSBs by HDR rather than NHEJ. By proceeding through an HDR mechanism, the frequency of unwanted indel mutations from off-target DSBs is minimized. GenScript is pleased to offer Broad-validated nickase vectors for gene editing in mammalian cells types.
SaCas9 Vectors
The Cas9 orthologue derived from Staphylococcus aureus, or SaCas9, has similar efficiency to SpCas9; however, SaCas9 is approximately 1 kb shorter. The primary advantage of SaCas9 is adeno-associated virus (AAV) packaging: the cargo size of AAV is approximately 4.5kb, and consequently packaging SpCas9 into this vector can be challenging (Ran et al, 2015). The relatively smaller size of SaCas9 makes CRISPR gene editing with AAV vectors possible. Considering the lower immunogenicity of these constructs, SaCas9 is therefore more suited for in vivo editing applications, such as for therapeutics.
SAM Vectors
CRISPR/Cas9 Synergistic Activation Mediator (SAM) is a protein complex engineered to enable robust transcriptional activation of endogenous genes – either a single gene at a time, or up to 10 genes simultaneously in the same cell. SAM takes advantage of the specificity and ease of reprogramming of Cas9 nucleases, which are targeted to a specific locus in the endogenous genome by guide RNA. Through a license with the Broad Institute*, GenScript offers validated SAM gRNA sequences to target any coding region in the human genome, as well as complimentary design of SAM gRNA for any other species. SAM guide RNA sequences are custom-synthesized and cloned into efficient lentiviral vectors, and accompanied by the Cas9-VP64 and MS2-P65-HSF1 components that form the three-part SAM complex.
The SAM complex consists of three components
1.A nucleolytically inactive Cas9-VP64 fusion: dCas9 is used to ensure that no strand breaks are introduced into endogenous genome; VP64 is a transcription activation domain that acts synergistically with p65 and HSF1 to enhance transcription.
2.An sgRNA incorporating two MS2 RNA aptamers at the tetraloop and stem-loop: the sgRNA should be designed to target the first 200 bp upstream of the transcription start site in order to target the SAM complex for ideal transcription activation. While sgRNA normally binds to Cas9, the MS2 RNA aptamers are required to allow the third member of the SAM complex to bind to the Cas9-sgRNA complex.
3.The MS2-P65-HSF1 activation helper protein: this contains two transcription activation domains, P65 and HSF1, that synergize with VP64 to robustly activate transcription of downstream coding regions. The MS2 domain allows his helper protein to bind to the sgRNA-dCas9 complex.
ویژگیهای خدمت
نام سرویس | CRISPR Cas Plasmids |
---|---|
محصول شرکت | GenScript Biotech |
پشتیبانی و هماهنگی | BMG Biotech |
نحوه سفارشگذاری | تکمیل فرم اولیه |
سایر خدمات کریسپر | ورود به دستهبندی CRISPR |
زمان تحویل | 3 تا 4 هفته |
ارائه محصول نهایی | فیزیکی همراه با سرتیفیکت |
پروسه سفارش CRISPR Cas Plasmids در BMG
ارسال اطلاعات
در گام نخست، با مراجعه به این بخش، اطلاعات مربوط به پروژه خود را برای ما میفرستید؛ به این نحو که نوع یا انواع خدمت CRISPR را مشخص کرده و توضیحات مورد نظر خود را درج مینمایید.
هماهنگی و پرداخت
پس از ارسال اطلاعات اولیه، نوبت به هماهنگیها، استعلام و اطلاعرسانی از جزئیات پروسه خواهد رسید. در این مرحله کارشناسان ما گام به گام همراه با شما به پیش میروند.
سنتز سازهها و تحویل
پس از انجام هماهنگیها و پرداخت وجه سفارش، عملیات سنتز یا خرید سازههای کریسپر توسط شرکت GenScript آغاز شده و محصول نهایی بهصورت فیزیکی تحویل پژوهشگر میگردد.
مزیتهای ما
تمایز در کیفیت و قیمت
دقیقترین و سریعترین سرویس
کارشناسان بینالمللی
امکانات نوین و فناوریهای پیشرفته
رویکرد تخصصی
حضور پژوهشگران بیوتکنولوژی
گواهینامهها
GenScript ISO 9001, ISO 13485