Synthetic CRISPR sgRNA چیست؟
در ویرایش ژنومی مبتنی بر CRISPR، دقت و بازدهی بالا نقشی کلیدی دارند. sgRNA سنتتیک (Synthetic single guide RNA) که با استفاده از فناوری‌های پیشرفته به‌صورت شیمیایی سنتز می‌شود، راهکاری ساده و مقرون‌به‌صرفه برای افزایش کارایی این سیستم است. این مولکول در مقایسه با sgRNA تولیدشده به روش رونویسی درون‌سلولی (IVT sgRNA)، بازدهی ویرایش بالاتری دارد، سمیت کمتری برای سلول‌ها ایجاد می‌کند و از پایداری بیشتری در محیط‌های مختلف آزمایشگاهی برخوردار است.
مطالعات نشان داده‌اند که GenCRISPR synthetic sgRNAs عملکرد موثری در ویرایش ژن‌های هدف، به‌ویژه در آزمایش‌های Knockout و واردسازی هدفمند (Knock-in) با واسطه HDR دارند. ترکیب sgRNA با پروتئین Cas9 در قالب یک مجموعه ribonucleoprotein (RNP)، در مقایسه با روش‌های مبتنی بر پلاسمید یا ویروس، مزایای متعددی دارد؛ از جمله کاهش واکنش ایمنی (immunogenicity)، افزایش دقت و کاهش اثرات خارج از هدف (off-target effects) و افزایش بازدهی در انواع مختلف سلول‌ها.
علاوه بر این، ما امکان سنتز سفارشی pegRNA را برای ویرایش اولیه (prime editing) و crRNA را برای سیستم‌های ویرایش Cpf1/Cas12a فراهم کرده‌ایم. این رویکردهای پیشرفته، دقت و انعطاف‌پذیری بیشتری را برای ویرایش ژنومی فراهم می‌کنند و کاربردهای متعددی در زمینه‌های تحقیقاتی، درمانی و بیوتکنولوژی دارند.
ابزار طراحی
گزینه‌های سنتز
اقتصادی‌ترین راه حل
ایده‌آل برای هر پژوهش و تحقیق
بازدهی ویرایش بالا
بدون توجه به نوع سلول
منعطف در مقیاس
از 1 تا 1000+ sgRNAs و از 2 تا 100+ نانومول
تاثیر حداقلی بر زیست‌پذیری سلول
کاهش اثرات خارج از هدف
مناسب برای سلول‌های اولیه و بنیادی
تاسیسات تولید پیشرفته
اتاق تمیز با ایزولاتور کلاس A در پس‌زمینه کلاس C
تضمین کنترل کیفیت جامع
روش اختصاصی NGS برای تایید هویت sgRNA
مورد اعتماد شرکای علمی بین‌المللی
تحویل موفقیت‌آمیز بیش از ۳۰ بچ با کیفیت cGMP
ویژگی‌های خدمت
| نام سرویس | Synthetic CRISPR sgRNA |
|---|---|
| محصول شرکت | GenScript Biotech |
| پشتیبانی و هماهنگی | BMG Biotech |
| نحوه سفارش‌گذاری | تکمیل فرم اولیه |
| سایر خدمات کریسپر | ورود به دسته‌بندی CRISPR |
| زمان تحویل | 3 تا 4 هفته |
| ارائه محصول نهایی | فیزیکی همراه با سرتیفیکت |
پروسه سفارش Synthetic CRISPR sgRNA در BMG
ارسال اطلاعات
در گام نخست، با مراجعه به این بخش، اطلاعات مربوط به پروژه خود را برای ما می‌فرستید؛ به این نحو که نوع یا انواع خدمت CRISPR را مشخص کرده و توضیحات مورد نظر خود را درج می‌نمایید.
هماهنگی و پرداخت
پس از ارسال اطلاعات اولیه، نوبت به هماهنگیها، استعلام و اطلاع‌رسانی از جزئیات پروسه خواهد رسید. در این مرحله کارشناسان ما گام به گام همراه با شما به پیش می‌روند.
سنتز سازه‌ها و تحویل
پس از انجام هماهنگیها و پرداخت وجه سفارش، عملیات سنتز یا خرید سازه‌های کریسپر توسط شرکت GenScript آغاز شده و محصول نهایی به‌صورت فیزیکی تحویل پژوهشگر می‌گردد.
مزیت‌های ما
تمایز در کیفیت و قیمت
دقیق‌ترین و سریع‌ترین سرویس
کارشناسان بین‌المللی
امکانات نوین و فناوری‌های پیشرفته
رویکرد تخصصی
حضور پژوهشگران بیوتکنولوژی
گواهینامه‌ها
GenScript ISO 9001, ISO 13485
سوالات متداول
چند توالی sgRNA یا crRNA برای Knock-out هدفمند نیاز است؟
حداقل 3 توالی crRNA برای اطمینان از Knock-out و دقت تجربی توصیه می‌شود. استفاده از جهش‌های Knock-out به‌طور مستقل، از اثرات ناخواسته جلوگیری می‌شود.
مزایای استفاده از sgRNA مصنوعی نسبت به روش‌های سنتی مبتنی بر پلاسمید یا ویروس چیست؟
● تولید سریع‌تر: sgRNA مصنوعی در عرض سه روز کاری از طریق سنتز شیمیایی تولید می‌شود، درحالی‌که روش‌های سنتی زمان بیشتری نیاز دارند.
● عدم ورود DNA خارجی: تحویل بدون DNA خارجی خطر ادغام تصادفی در ژنوم را کاهش می‌دهد.
● شناسایی سریع: پس از انتقال، سطح بالایی از sgRNA در سلول قابل مشاهده است.
● پاک‌سازی سریع‌تر از سلول: باعث کاهش اثرات ناخواسته می‌شود.
● کارایی بالا: حتی در سلول‌های سخت‌تکثیر عملکرد مطلوبی دارد.
● ظرفیت بسته‌بندی بالا: امکان سنتز تا 200 نوکلئوتید (nt).
● سمیت کمتر: در مقایسه با gRNA تولیدشده از پلاسمید یا ویروس.
تفاوت استفاده از sgRNA مصنوعی با crRNA+tracrRNA چیست؟
در استفاده از sgRNA، نیازی به مرحله اتصال crRNA و tracrRNA قبل از استفاده نیست. مطالعات نشان داده‌اند که sgRNA از نظر پایداری و کارایی ویرایش ژن بهتر از ترکیب crRNA/tracrRNA عمل می‌کند.
مزیت sgRNA مصنوعی نسبت به sgRNA ترانسکریپت‌شده (IVT) چیست؟
sgRNA ترانسکریپت‌شده در آزمایشگاه (IVT) توسط RNA پلیمراز فاژی تولید می‌شود و حاوی 5'-تری فسفات است که می‌تواند پاسخ ایمنی را در برخی سلول‌ها فعال کند. در مقابل، sgRNA مصنوعی فاقد این اصلاحات بوده و کارایی ویرایش بهتری دارد.
چرا باید از sgRNA اصلاح‌شده به جای نسخه‌های بدون اصلاح استفاده کنم؟
sgRNA اصلاح‌شده دارای تغییرات 2'-O-methyl و فسفوروتیوات در سه رزیدوی انتهایی RNA است که باعث افزایش پایداری آن در برابر هیدرولیز و تخریب توسط نوکلئازها می‌شود.
چه قالب‌ها و فرمت‌هایی برای تحویل sgRNA وجود دارد؟
sgRNA می‌تواند به‌صورت لوله‌های تکی یا صفحات 96 چاهک، به‌صورت پودر خشک یا محلول در بافر TE (pH 8.0، 100 µM) یا آب بدون نوکلئاز تحویل داده شود.
حداکثر طول sgRNA که می‌توان به‌صورت شیمیایی سنتز کرد چقدر است؟
ما می‌توانیم sgRNA را تا طول 200 نوکلئوتید (nt) به‌صورت شیمیایی سنتز کنیم.
آیا می‌توان sgRNA را به‌صورت کتابخانه آرایه‌بندی‌شده سفارش داد؟
بله، ما امکان تحویل sgRNA سنتز‌شده شیمیایی را به‌صورت آرایه‌بندی‌شده در صفحات 96 چاهک فراهم کرده‌ایم. هر چاهک می‌تواند شامل sgRNA سفارشی‌شده برای یک ژن خاص باشد.
چه درجاتی از sgRNA موجود است؟ آیا گزینه‌ای برای استاندارد GMP وجود دارد؟
EasyEdit sgRNA: تصفیه‌شده با روش Desalt، تحویل سریع و مقرون‌به‌صرفه، مناسب برای غربالگری یا تحقیقات اولیه.
SafeEdit sgRNA: تصفیه‌شده با HPLC که حداقل 90% خلوص را تضمین می‌کند، مناسب برای مراحل تأیید و توسعه.
چگونه باید sgRNA را نگهداری کنم؟
● sgRNA پودری را در بافر TE با غلظت 100 پیکومول در میکرولیتر حل کنید.
● آن را به قسمت‌های کوچک تقسیم کرده و در دمای منهای 20 درجه سانتیگراد نگهداری کنید.
● از یخ‌زدایی و انجماد مکرر اجتناب کنید. برای ذخیره طولانی‌مدت، دمای منهای 80 درجه سانتیگراد توصیه می‌شود.
آیا برای استفاده از sgRNA در آزمایش‌های CRISPR به کنترل نیاز دارم؟
بله، استفاده از کنترل‌های معتبر ضروری است. برخی از کنترل‌های رایج:
● کنترل مثبت: برش ناحیه‌ای استاندارد و اثبات عملکرد صحیح سیستم.
● کنترل منفی: بدون sgRNA برای بررسی تاثیرات غیرمستقیم.
● کنترل ساختگی: برای بررسی کارایی و بهینه‌سازی شرایط.
علاوه بر sgRNA، چه مواد دیگری برای ویرایش ژن CRISPR نیاز دارم؟
● پروتئین Cas9 برای برش DNA هدف.
● توالی PAM (مانند NGG برای SpCas9).
● الگوی HDR (در صورت نیاز) برای وارد کردن جهش‌ها یا درج‌های خاص.
پایداری مجموعه RNP چقدر است؟
● مجموعه RNP بسته به نوع پروتئین Cas و شرایط نگهداری می‌تواند پایدار بماند.
● در دمای منهای 20 یا منهای 80 درجه سانتیگراد ممکن است تا یک سال بدون بازدارنده RNase پایدار بماند.
● توصیه می‌شود از RNP تازه استفاده شود و از یخ‌زدایی و انجماد مکرر خودداری کنید.
